SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis에 의한 단백질의 분리 결과레포트

1. Results

 모든 효소들의 효소 size는 48 ~ 63 kDa로 측정되었다. 효소의 size는 1>4>2>3 순서이며, band의 길이는 2번이 가장 길고 band의 두께는 3번이 가장 두껍다.

 

 

2. Discussion

 SDS-PAGE는 전기영동기술이며, 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 protein folding, posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다. 이미 알고 있는 분자량 단백질(분자량 마커)의 이동도를 측정한 전기영동 결과로 밴드의 유무나 굵기 등을 비교하며 단백질의 크기와 발현량을 확인한다.

 겹치는 band 없이 각 sample들이 곧게 내려온 것을 알 수 있다. Alpha-amylase는 희석배수는 동일하고 loading 양을 다르게 설정하였다. Loading 농도가 더 높은 alpha-amylase의 band 길이가 더 길다. 또한 proteases는 loading 양은 같지만 희석배수는 다르게 하였으며, 효소의 양이 더 많은 3번의 band가 가장 두껍다. 이에 따라 Loading 농도가 높을수록 전기영동 band의 길이가 더 길고 효소의 농도가 높을수록 band의 두께가 두껍고 진해진다는 사실을 알 수 있다.

 다른 조들과 실험 결과를 비교해보면 효소 size는 모두 비슷하게 나온 것으로 생각된다. 하지만 2조의 실험 결과가 다소 흐릿하게 나온 것으로 보인다. 이는 내려가는 도중 기포가 들어갔거나 loading 시에 sample 용액들이 well에서 흘러 나간 것으로 추측된다. 또한 4조의 경우 BlueElf protein marker의 band가 다른 조들에 비해 다소 기울어져 있다. 많이 기울어지게 되어 다른 band의 영역을 침범하면 결과에 오차가 생길 수 있다. 그러므로 gel 제작 중 comb을 끼우고 뺄 때 일직선 상에서 천천히 빼도록 유의해야 한다.

 

3. Reference

1) 양성렬, 인체생화학, 포널스출판사, 2015, 27-28

2) 생화학분자생물학회, 생화학백과, 생화학분자생물학회, 2019, 1193

3) O. R. Adeoyo, B. I. Pletschke, J. F. Dame. Purification and characterization of an amyloglucosidase from an ericoid mycorrhizal fungus (Leohumicola incrustata). 2018. AMB Express. vol8: 154.

4) Mehta Deepika, Satyanarayana Tulasi. Bacterial and Archaeal α-Amylases: Diversity and Amelioration of the Desirable Characteristics for Industrial Applications. 2016. Frontiers in Microbiology vol7: 1129.

5)    Musa, M., Radman, M. & Krisko, A. Decreasing translation error rate in Escherichia coli increases protein function. 2016. BMC Biotechnol 16, 28.